逆转录病毒载体介导Neo^R基因转入正常人造血祖细胞

摘要

本文应用逆转录病毒载体介导基因转移法将含有新霉素抗性(neo^R)基因的双拷贝逆转录病毒载体pN2A转入正常人造血祖细胞。应用Ficoll分层液(比重1.064)富集人造血干、祖细胞,预培养后与已经照射的生产重组病毒包装细胞株共同培养24小时,经含G418(1000μg/ml)体外半固体培养,可见具有抗性的CFU-GM集落生长。应用PCR方法检测转染细胞中neo^R基因的转移和表达,在生产逆转录病毒的辅助细胞株PA317/N2及体外液体培养的骨髓细胞中均可扩增出neo^R基因的DNA片段,进一步证实了neo^R基因在正常人造血干、祖细胞的有效转移和表达。