hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用

摘要

为了研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用,并探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖状态,应用TRAP-ELISA、TRAP-PAGE方法检测HL-60细胞端粒酶活性.结果发现:反义硫代寡核苷酸作用于HL-60细胞72小时后,hTERT基因表达明显受抑,细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及浓度、时间依赖性.端粒酶活性检测显示:反义寡核苷酸10、20和30 μmol/L作用组OD450-690值分别为1.504±0.47、1.223±0.39,0.944±0.16,与未作用组(2.648±0.42)比较,差异有显著性(P＜0.05);正义寡核苷酸20 μmol/L作用组(OD450-690值为2.376±0.65)与未作用组比较,差异无显著性(P＞0.05).TRAP-PAGE检测表明: hTERT ASODN作用组较SODN作用组端粒酶条带明显减少,以30 μmol/L作用组条带最少.结论: hTERT基因反义寡核苷酸能够通过封闭hTERT基因的表达而抑制HL-60细胞增殖,下调端粒酶活性.