2-甲氧基雌二醇诱导K562细胞凋亡及机制研究

摘要

本研究探讨2.甲氧基雌二醇(2-ME2)对K562细胞的诱导凋亡作用及其机制.采用不同浓度2-ME2处理K562细胞,MTT法检测K562细胞的增殖活性,DNA琼脂糖凝胶电泳和AnnexinV/PI双染色法检测K562细胞的凋亡效应.流式细胞术检测细胞线粒体膜电位的变化,RT-PCR和Western blot方法分别检测相关基因mRNA和/或蛋白的表达变化.结果表明:2-ME2抑制K562细胞增殖呈时间和剂量依赖性;48小时的半数抑制浓度(IC50)为2μmol/L;2 μmol/L 2-ME2作用于K562细胞24、48、72小时,DNA凝胶电泳分析可见典型DNA梯形条带;AnnexinV/PI双染色法检测显示,细胞凋亡率分别为13.78%、22.32%和29.43%,而对照组凋亡率仅为1.78%(P<0.05);1、2和4 μmol/L 2-ME2分别处理K562细胞24小时,流式细胞术检测显示细胞线粒体膜电位下降;2 μmol/L2-ME2处理K562细胞24、48和72小时,K562细胞中bcr/abl、bcl-2 mRNA表达下调,而bax mRNA表达上调,Bcl-2、procaspase-3、procaspase-9、PARP(116 kD)和p-Akt蛋白表达下调,胞浆Cyto-C和PARP活性片段(85 kD)表达上调.而对总Akt蛋白表达无影响.结论:2-ME2通过升高bax/bcl-2比值降低线粒体膜电位、促使细胞色素C(Cyto-c)释放入胞浆、触发K562细胞的线粒体凋亡途径,活化caspase-3,导致K562细胞凋亡并抑制其增殖;通过下调bcr/abl mRNA表达以阻断PI3K/Akt信号通路也参与了该过程.