CD48表达可作为区分造血干细胞分裂方式的活性标志

摘要

造血干细胞在细胞分裂时具有维持自我更新和产生定向分化的能力,其依赖于三种细胞分裂方式,一个干细胞产生两个新的干细胞(对称的更新分裂)、两个分化细胞(对称的分化分裂)或者一个干细胞和一个分化细胞(不对称分裂).本研究旨在探索一种高效、稳定的区分造血干细胞分裂方式的方法.前期研究表明,Numb蛋白的分布情况可以作为许多细胞辨别分裂方式的标志,本研究利用免疫荧光技术检测Numb蛋白在小鼠分裂期CD48-CD150+ LSK细胞中的分布情况,探索Numb蛋白与中心体的关系.由于CD48表达阳性标志着细胞失去了骨髓重建能力,因此本研究把CD48的表达作为区分造血干细胞自我更新或定向分化的一个活性标志.从小鼠全骨髓细胞中分选出CD48-CD150+ LSK细胞,培养体系中加入自行制备的AF 488-conjugated anti-CD48抗体,培养3d后共聚焦荧光显微镜观察及流式细胞分析是否存在AF488+细胞及其所占比例,然后二次分选AF488+和AF488-细胞进行细胞集落形成实验(colony forming cell assay,CFC)与细胞增殖能力比较.结果表明:Numb蛋白在处于分裂期的CD48-CD150+ LSK细胞中对称或不对称分布在细胞分裂平面两侧,这提示Numb蛋白染色可以作为一种区分造血干细胞分裂方式的方法.此外,CD48-CD150+ LSK细胞在含有自行制备的AF488-conjugatedanti-CD48抗体的培养体系中培养3d后产生约40％ AF488+细胞,共聚焦荧光显微镜统计的阳性细胞比例与流式细胞分析检测结果一致.二次分选AF488+和AF488-细胞,AF488+细胞群的集落形成能力显著高于AF488-细胞群(P＜0.05),AF488-细胞群的增殖能力显著高于AF488+细胞群(P＜0.05).结论:CD48表达作为细胞干性丢失的活性标志,可区分造血干细胞的分裂方式.该方法与Numb蛋白染色方法相比,具有用于活细胞的优势,它为后续的细胞培养与细胞移植等研究工作提供了更大的便利.