hnRNPA1基因在家蚕翅原基组织中的表达与定位分析

摘要

核不均一蛋白A1(hnRNPA1)是一个重要的RNA结合蛋白.本研究旨在获得家蚕hnRNPA1基因的cDNA,并对其在家蚕翅原基组织进行表达和定位分析.以家蚕幼虫期翅原基mRNA为模板通过反转录克隆家蚕BmhnRNPA1基因的全长cDNA,并对其进行生物信息学分析.构建pET32a-BmhnRNPA1蛋白表达载体,表达且纯化得到BmhnRNPA1重组蛋白,并制备该蛋白多克隆抗体,通过实时荧光定量RT-PCR、Western blot和免疫组化方法检测BmhnRNPA1在家蚕幼虫和蛹翅原基组织中的表达与定位.克隆得到了家蚕hnRNPA1基因的全长cDNA片段,其开放阅读框(ORF)序列为951 bp,编码316个氨基酸,预测分子量为34.98 kDa,等电点为5.15.编码蛋白在第18～90个氨基酸和109～181个氨基酸处为保守的RRM结构域.系统进化分析显示,家蚕hnRNPA1与小菜蛾hnRNPA1的亲缘关系最近.QRT-PCR结果显示,BmhnRNPA1在家蚕幼虫和蛹期的翅原基组织中均有表达,且在蛹期第3天的表达量达到峰值.Western blot进一步证实了实验结果.免疫组化分析结果显示,该蛋白存在于翅原基组织中,并定位于细胞核内.家蚕BmhRNPA1具有两个RNA结合结构域,属于hnRNPs家族,定位于细胞核内,表明其可能参与mRNA的选择性剪接作用.本研究结果为进一步探索该基因的功能提供了基础.