家蚕翅原基发育的组织形态学观察及BmSRF基因的原位杂交

摘要

家蚕是完全变态昆虫，其成虫的一些器官是由成虫盘发育而来。翅原基是家蚕成虫盘之一，位于第2和第3胸节的两侧，分别发育为成虫的前后翅。在家蚕的一生，尤其在幼虫到蛹以及蛹到成虫的变态过程中，翅原基发生着很大的变化。家蚕有着十分丰富的遗传突变资源。在家蚕翅发育形态学方面的研究已有报道，但对于其他突变体的形态变化所知不多，他们在组织形态学上到底差异如何我们还不清楚。 本论文通过对家蚕正常型(大造)与突变型(cf)材料进行解剖测量，初步获得了上簇前翅原基在宏观上的变化规律，找出了两种材料翅原基在宏观上发育的不同；利用石蜡切片技术，获得家蚕翅原基不同发育时期的显微实体照片，印证补充了前人关于家蚕翅原基发育的形态学研究，为家蚕翅原基发育基因功能研究提供形态学参考照片；克隆了可能与cf突变体形成有关的基因BmSRF,以家蚕大造5龄3天的翅原基为材料，以克隆的BmSRF基因标记cDNA探针，获得了家蚕BmSRF基因组织定位信息。研究结果如下： 1.以家蚕正常型(大造)与突变型(cf)翅原基为材料对其进行解剖，利用imageJ测量软件进行测量，获得其发育规律，找出了两种材料翅原基在宏观上发育的不同以及差异时期。大造翅原基在五龄2d到3d与4d到5d及8d到上簇时期变化最大，而对于cf突变体翅原基在五龄2d到3d与4d到5d及6d到上簇时期变化最大。 2.获得了家蚕五龄各时期翅原基发育的实体照片，观察到了翅原基开始伸展的时期并获得了其向外伸展过程的连续图片，区分了与翅原基发育相关的各个组织，如肌肉组织、气管、结缔组织等组织图片。比较了正常型、突变型翅原基发育的不同，发现此突变型(cf)较正常型没有本质上的差异，都有气管丛的出现、翅芽的伸展等。不同的是在翅芽的大小上正常型的要小于突变型的；另一差异在于，正常型翅囊5龄3d时与翅芽分开且变薄，5龄4d翅芽向外展开，而突变型的翅芽5龄2d开始展开，5龄4d时翅囊变薄。 3.以家蚕5龄3d翅原基cDNA为模板，克隆了翅原基发育相关基因BmSRF,对此基因进行了生物信息学分析，发现家蚕中的SRF同源基因由3个外显子组成，ORF为906bp，编码了302个氨基酸。该基因在整个翅发育时期都有表达。在幼虫期，从5龄1天起至预蛹期，其表达量逐渐降低，后表达量慢慢升高，到化蛹第1天(Pl)，其表达量骤然提高。 4.利用已初步建立的原位杂交体系对家蚕BmSRF基因进行了定位，结果表明家蚕BmSRF。基因仅在翅原基组织中表达，而对于其发育相关组织如气管、肌肉等没有信号。

目录

文摘

英文文摘

声明

1文献综述

1.1概述

1.2家蚕翅原基研究概况

1.2.1家蚕的翅原基发育过程

1.2.2家蚕翅原基研究进展

1.2.3 DSRF基因研究进展

1.3组织形态学研究方法

1.3.1生物体解剖技术

1.3.2组织非切片技术

1.3.3组织切片技术

1.3.4超薄切片技术

1.3.5组织化学与细胞化学技术

1.4石蜡切片技术的应用

1.4.1病理学检测

1.4.2三维重建

1.4.3免疫学技术结合

1.4.4石蜡包埋组织流式细胞仪DNA含量分析

1.4.5石蜡切片标本与形态计量技术

1.4.6原位PCR(in situ PCR)

1.5原位杂交的发展及应用

1.5.1原位杂交技术的发展

1.5.2原位杂交技术的应用

2引言

2.1研究背景

2.2研究目的和意义

2.3研究技术路线

3材料与方法

3.1材料

3.1.1家蚕品系及实验材料的获得

3.1.2主要仪器

3.1.3主要试剂的配制

3.2方法

3.2.1家蚕翅原基的解剖及测量

3.2.2家蚕翅原基石蜡切片及H.E.染色

3.2.2 BmSRF基因的克隆以及翅原基的原位杂交

4结果与分析

4.1家蚕翅原基的解剖及测量

4.2家蚕翅原基发育组织学研究

4.2.1家蚕正常型(大造)翅原基组织学研究

4.2.2家蚕突变型(cf)翅原基组织学研究

4.3 BmSRF基因的克隆以及翅原基的原位杂交

4.3.1 BmSRF基因的信息分析与克隆

4.3.2 BmSRF基因探针的制备与原位杂交

5讨论

5.1家蚕翅原基解剖学的研究

5.2家蚕翅原基组织切片形态学研究

5.3家蚕石蜡切片基础上的原位杂交体系的建立与BmSRF基因的原位杂交

6结论

参考文献

附录

致谢