菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒EP-1-like基因克隆、原核表达与多克隆抗体制备方法

摘要

本实验提取被菜蛾盘绒茧蜂寄生后24 h的小菜蛾幼虫体内总RNA,反转录合成cDNA,以此为模板PCR扩增出菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒(Cotesia vestalis polydnavirus,CvBV)EP-1-like基因,将其分别克隆到表达载体pET30a、pET28a中,转化宿主菌BL21(DE3),获得单克隆重组质粒pET-30a-EPIL和pET-28a-EP1L.经IPTG诱导,pET-28a-EP1L成功表达了约34.8 kDa的包涵体蛋白.将诱导条件优化以后,采用割胶回收的方法纯化包涵体,将纯化后的表达蛋白免疫新西兰大耳兔制备多克隆抗体.ELISA分析表明制备的抗体效价达1:128000,Westernblot检测证明抗体具有良好的免疫反应特异性.