基于28S rRNA基因的PCR-RFLP分析对赤拟谷盗与杂拟谷盗进行分子鉴定

摘要

本研究拟利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析方法对赤拟谷盗Tribolium castaneum (Herbst)和杂拟谷盗Tribolium confusum(Jac du Val)进行分子鉴定,以期为仓储害虫管理和口岸检疫提供技术帮助和支持.采用通用引物对赤拟谷盗和杂拟谷盗的28S rRNA基因进行了PCR扩增、序列测定和分析,结果发现:扩增片段长约1070 bp,该序列种内均无变异位点、种间有76个变异位点,即种内没有核苷酸替换发生、种间核苷酸替换发生76次,其中转换56次,颠换20次,转换/颠换的比值为2.80.用限制性内切酶PvuⅠ对赤拟谷盗和杂拟谷盗的28S rRNA基因扩增产物进行酶切,电泳检测显示,赤拟谷盗和杂拟谷盗的28S rRNA基因扩增产物的PvuⅠ酶切图谱(分别产生2个和3个酶切条带)明显不同,因此本研究建立的28SrRNA基因PCR-RFLP方法可用于赤拟谷盗与杂拟谷盗的分子鉴定.