抗口蹄疫病毒phage-scFv及可溶性scFv的构建

摘要

利用重组DNA技术在抗口蹄疫病毒单克隆抗体1C7 VH基因和VL基因之间导入一段连接肽[(Gly4Ser)3],采用重叠延伸拼接法,经聚合酶链反应(PCR)扩增获得scFv基因.将scFv基因克隆至噬菌粒pCANTAB 5E载体,转化E.coli TG1,构建噬菌体抗体文库.用M13KO7辅助噬菌体挽救及固相口蹄疫病毒(FMDV)抗原对噬菌体抗体文库的三轮"吸附-洗脱-扩增"的淘洗,筛选出scFv阳性克隆.将阳性克隆转化E.coli BH2151,通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导可溶性scFv蛋白的表达.酶联免疫吸附实验(ELISA)检测表明:scFv克隆表达的phage-scFv及可溶性scFv与FMDV亲和力高,特异性强.