氧化葡萄糖杆菌ddsA基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要

聚十异戊烯焦磷酸合成酶催化异戊烯二磷酸与丙烯基二磷酸发生连续的缩合反应生成聚十异戊烯焦磷酸,构成辅酶Q10的侧链.将氧化葡糖杆菌(Gluconobacter oxydans)的染色体DNA用EcoRI酶切,回收5.0kb左右的片段为模板,通过PCR扩增得到了聚十异戊烯焦磷酸合成酶基因(ddsA).测序分析表明该基因有一个951bp的开放型阅读框架,氨基酸序列与其他聚戊烯焦磷酸合成酶具有高度同源性(30%～50%).将ddsA基因克隆到pUC19载体上得到pUC-GZH表达质粒,将其转入大肠杆菌JM83宿主,经IPTG诱导表达融合蛋白,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的37ku处出现相应的条带.