保存液及保存条件对中华绒螯蟹精子存活率的影响

摘要

以精子存活率和精子密度作为判据,研究了低温(4℃)条件下6种保存液体外保存中华绒螯蟹精子的效果.精子存活率采用伊红染色法检测,六种保存液分别为无钙离子人工海水I、无钙离子人工海水II、海水等渗NaCl溶液、无菌中华绒螯蟹生理盐水、海水等渗KCl溶液和海水等渗葡萄糖溶液.结果显示,六种保存液中海水等渗KCl溶液和海水等渗葡萄糖溶液的保存效果最差,保存2d后精子即全部死亡,而两种无钙离子人工海水的保存效果较好,其中以无钙离子人工海水II的效果尤佳,其保存6d后的精子存活率达92.19%,精子密度亦保持较高水平;故无钙离子人工海水II是中华绒螯蟹精子短期体外保存的理想保存液.在此基础上以无钙离子人工海水II作保存液,研究了精子密度、保存液pH值和渗透压对保存效果的影响.结果显示,不同精子密度的保存效果差异显著,其中以106～107个/mL的保存密度效果最好,在保存2d后精子存活率仍保持在95%以上;在7～10的范围内保存效果较好,保存15d后精子存活率均在90%以上;在以NaCl配制的渗透压范围为500～1 000mOsmol/kg H2O的10个梯度保存液中,渗透压在750～850mOsmol/kg H2O的范围内保存效果最好,该条件下保存15d后精子存活率仍在75%以上.以上结果证实,中华绒螯蟹精子适宜的保存条件为:精子密度为106～107个/mL,渗透压范围为750～850mOsmol/kg H2O,pH值为pH7～10.