HA蛋白多肽抗体的设计、制备与鉴定

摘要

利用人工合成的多肽制备HA的特异性多克隆抗体,以期用于HA基因的免疫调控机制研究.根据GenBank中报道的皮蝇素A(Hydermin A,HA)一级结构信息以及HA抗原生物学信息,获得三段序列特异性较高的多肽,采用9一氟甲氧羰基固相合成法获得多肽,采用HPLC和LC·MS测定合成多肽的浓度和分子量,试验表明目的多肽纯度达91.2％、目的多肽分子量为28 kD.将多肽与KLH进行偶联,并用其免疫新西兰大白兔以获得抗血清和多克隆抗体.采用ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,经ELISA检测表明抗血清可与Pep发生特异性免疫反应,经Western blotting试验表明抗血清和多克隆抗体可识别HA特异性条带,其相对分子量为28 kD,与预测分子量相符.该抗体的制备为研究HA免疫调控机制提供了有用工具.