红鳍东方鲀白介素15的原核表达及其活性测定

摘要

为了开发红鳍东方鲀Takifugu rubripes免疫基因及其重组表达,生产重组免疫因子蛋白,通过提取红鳍东方鲀肾脏组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增得到白介素15（interleukin15,IL15）基因序列,将IL15成熟肽序列与原核表达载体p ET-32a（＋）连接,成功构建重组表达载体（重组子）p ET-32a（＋）-IL15,并将其重组子转化至Escheria coli BL21（DE3）感受态细胞中获得重组表达IL15的基因工程菌,再经IPTG诱导,p ET-32a（＋）-IL15在BL21中得到了融合表达。结果表明：通过对表达产物的纯化和Western Blotting检测,红鳍东方鲀IL15在大肠杆菌中的表达量较高,蛋白浓度为294.6μg/m L;用MTT法对该蛋白进行活性鉴定显示,加入稀释10倍和100倍的重组红鳍东方鲀IL15蛋白时,CTLL-2细胞的增殖率相对较高,分别为71%和73%。研究表明,重组红鳍东方鲀IL15蛋白具有体外促进CTLL-2细胞增值的能力。