人凝血因子Ⅸ-V107A-R338A高活性突变体在毕赤酵母中的表达及活性测定

摘要

目的 人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)在人类内源性凝血过程中起着非常重要的作用.hFⅨ表达量绝对或相对不足会导致B型血友病.本研究用毕赤酵母生产重组高活性突变体hFⅨ-V107A-R338A.方法 首先构建pPICZaA-hFⅨ-V107A-R338A酵母分泌表达载体,其次将其用电转化入毕赤酵母SMD1168中,再次利用G418抗药性的能力筛选表达量高的单克隆重组菌株,培养并将表达产物纯化,稀释后检测其凝血活性.结果 通过本研究获得的重组SMD1168-hFⅨ-V107A-R338A表达量达到80-120 mg/L;活力约为人血中野生型hFⅨ凝血活性的(44.06±2.3)％,比野生型的酵母重组hFⅨ高7.75倍,比单突变R338A高13.17％.结论 人凝血因子Ⅸ高活性突变体V107A-R338A是潜在的天然凝血因子替代品.