自噬抑制剂3-MA对缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞表达TNF-α的抑制作用

摘要

目的 研究自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对缺氧条件下人视网膜色素上皮(RPE)细胞表达肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响.方法 将体外培养的ARPE-19细胞随机分为对照组、缺氧组和3-MA+缺氧组,对照组细胞在常氧条件下培养,缺氧组细胞在缺氧箱(1％O2/5％CO2/94％N2)中进行培养,3-MA+缺氧组先在培养基中加入10 mM 3-MA,然后置于缺氧箱中继续培养.采用Western blot法检测各组细胞的自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3 B(LC3B)、Beclin-1及p62的表达;采用ELISA法检测各组细胞上清液中TNF-α的浓度.结果 ①对照组、缺氧组、3-MA+缺氧组细胞的TNF-α浓度分别为(59.46±5.22)pg/ml、(135.80±11.30)pg/ml和(105.88±10.42)pg/ml,总体比较差异有统计学意义(F=50.53,P=0.000),缺氧组的TNF-α浓度明显高于对照组和3-MA+缺氧组,差异均有统计学意义(均P<0.01),3-MA+缺氧组的TNF-α浓度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).②对照组、缺氧组、3-MA+缺氧组细胞中的LC3B-II/LC3B-I值、Beclin-1值及p62值分别为(0.20±0.03、0.58±0.07和0.40±0.09)、(0.32±0.04、0.97±0.05和0.78±0.06)和(1.03±0.02、0.32±0.10和0.78±0.08),组间总体比较差异均有统计学意义(LC3B-II/LC3B-I:F=21.73,P=0.002;Beclin-1:F=149.34,P=0.000;p62:F=69.53,P=0.000).缺氧组细胞中LC3B-II/LC3B-I值和Beclin-1值均明显高于对照组和3-MA+缺氧组,差异均有统计学意义(均P<0.05),3-MA+缺氧组的LC3B-II/LC3B-I值和Beclin-1值均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05).缺氧组细胞中p62值明显低于对照组和3-MA+缺氧组,差异均有统计学意义(均P<0.01),3-MA+缺氧组的p62值低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 缺氧激活RPE细胞自噬并促进其TNF-α的表达,自噬抑制剂3-MA可在一定程度上抑制自噬进程,从而发挥抑制细胞表达TNF-α的作用.