细胞外信号调节激酶通路在儿童原发性肾病综合征激素耐药中的作用机制探讨

摘要

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)通路在儿童肾病综合征糖皮质激素耐药中的作用机制.方法 ①收集儿童肾病综合征激素耐药和激素敏感患儿外周血单个核细胞(PBMCs),Western-blot印迹法检测磷酸化ERK水平,激光共聚焦显微镜观察糖皮质激素受体GRα核转位情况.计算核浆比;②体外观察ERK抑制剂U0126对激素耐药患儿PBMCs GRα核转位的影响;③超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B型(SEB)体外诱导糖皮质激素抵抗模型中ERK活化时程;④观察ERK抑制剂U0126逆转超抗原SEB诱导的糖皮质激素抵抗作用;⑤观察ERK抑制剂U0126对激素抵抗细胞模型GRα核转位的影响.结果 ①激素耐药患儿PBMCs存在显著的ERK磷酸化以及糖皮质激素受体GRα核转位障碍;②ERK抑制剂U0126可以逆转激素耐药患儿PBMCs糖皮质激素受体GRα核转位障碍;③超抗原SEB体外诱导可以导致糖皮质激素抵抗发生,ERK抑制剂U0126后可解除SEB诱导的激素抵抗;④SEB作用1 min后即出现p-ERK1/2,在24h仍维持在高水平表达.结论 激素耐药患儿PBMCs存在显著的ERK活化,体外超抗原SEB刺激PBMCS后出现糖皮质激素抵抗,其作用机制显著持续的ERK活化,ERK抑制剂可逆转激素耐药患儿PBMCs及体外超抗原SEB诱导的糖皮质激素抵抗发生.