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前言
1家族性激素耐药型肾病综合征家系NPHS2基因的分析
1.1实验材料
1.1.1研究对象
1.1.2标本收集
1.1.3引物设计
1.1.4主要仪器
1.1.5主要药品、试剂及其配制
1.2方法
1.2.1肾组织间接免疫荧光染色
1.2.2基因组DNA的提取与定量
1.2.3 PCR扩增NPHS2基因8个外显子
1.2.4 DHPLC分析
1.2.5 DNA序列测定
1.3结果
1.3.1肾脏病理及常规免疫病理
1.3.3琼脂糖凝胶电泳鉴定
1.3.4 DHPLC检测条件的建立
1.3.5 DHPLC分析结果
1.3.6 DNA测序结果
附图
1.4讨论
1.5小结
2散发性激素耐药型肾病综合征患儿NPHS2基因的分析
2.1实验材料
2.1.1研究对象
2.1.2引物设计
2.1.3主要仪器
2.1.4主要药品、试剂及其配制
附表
2.2方法
2.2.1基因组DNA的提取与定量
2.2.2 PCR扩增NPHS2基因8个外显子
2.2.3 DHPLC分析
2.2.4 DNA序列测定
2.2.5统计学分析
2.3结果
2.3.1 23例散发性SRNS患儿的临床资料
2.3.2 DHPLC分析结果
2.3.3 DNA测序结果
2.3.4基因型和等位基因频率
附图表
2.4讨论
2.5小结
3突变NPHS2基因在真核细胞中的表达
3.1实验材料
3.1.1研究对象
3.1.2主要试剂及试剂盒
3.1.3主要仪器
3.1.4主要液体配制
3.2方法
3.2.2分别构建含有NPHS2基因467_468insT突变cDNA和503G>A突变cDNA的克隆载体
3.2.3分别构建含有野生型NPHS2基因cDNA、467_468insT突变cDNA和503G>A突变cDNA的表达载体
3.2.4质粒DNA的大量制备
3.2.5转染HEK293细胞
3.2.6应用间接免疫荧光染色,用共聚焦显微镜观察podocin的荧光强度及其在细胞内的定位
3.3结果
3.3.1从正常肾组织中提取总RNA结果
3.3.2 PCR扩增NPHS2基因编码区全长cDNA结果
3.3.3构建分别含有野生型NPHS2基因全长编码区cDNA、467_468insT突变cDNA和503G>A突变cDNA的克隆载体结果
3.3.4构建分别含有野生型NPHS2基因全长编码区cDNA、467_468insT突变cDNA和503G>A突变cDNA的表达载体结果
3.3.5大量制备质粒DNA结果
3.3.6 HEK293细胞podocin免疫荧光双标记染色结果
3.4讨论
3.5小结
4激素耐药型肾病综合征儿童糖皮质激素受体基因的检测和分析
4.1实验材料
4.1.1研究对象
4.1.2引物
4.1.3主要仪器
4.1.4主要药品、试剂及其配制
4.2方法
4.2.1基因组DNA的提取与定量
4.2.2分离外周血淋巴细胞
4.2.3从外周血淋巴细胞中提取总RNA
4.2.4 PCR扩增NR3C1基因片段
4.2.5 PCR扩增NR3C1基因alpha-cDNA、beta-cDNA和ACTB基因cDNA及RT-PCR产物的鉴定
4.2.6 DHPLC分析
4.2.7 DNA序列测定
4.2.8统计学分析
4.3结果
4.3.1 NS患儿临床资料
4.3.2从外周血淋巴细胞提取总RNA
4.3.3 RT-PCR结果
4.3.4 DHPLC分析结果
4.3.5 DNA测序结果
4.3.6NR3C1基因单倍体3和单倍体5的等位基因频率
4.4讨论
4.5小结
参考文献
附录 英文缩写词
成果
综述 肾病综合征激素耐药与NPHS2基因
致谢
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