安罗替尼在肝癌中耐药的差异mRNA筛选

摘要

目的 运用ceRNA芯片筛选可能参与肝癌细胞对安罗替尼耐药过程的mRNA.方法 利用大剂量冲击联合低剂量诱导的方法 建立对安罗替尼耐药的肝癌细胞,用CCK8实验进行验证耐药细胞在安罗替尼作用下的细胞增殖差异;运用ceRNA芯片检测耐药肝癌细胞与正常肝癌细胞的基因表达差异;运用实时荧光定量PCR(real-time PCR)对部分芯片测出的部分基因差异进行验证.计量资料两组间比较采用独立样本t检验,Kaplan-Meier法对肝癌样本的总生存期进行生存分析,log-rank检验比较生存率差异.芯片筛选结果 使用Fisher精确检验.结果 耐药肝癌细胞与正常肝癌细胞基因表达差异较大,通过缩减范围筛选出差异最大的10个基因进行分析.与耐药和肿瘤生长相关的基因有4个,分别为BIRC2、BIRC7、ABCC2、MAPK8.其中BIRC2、ABCC2、MAPK8表达水平下降(P值分别为0.0014、0.0012、0.0118),BIRC7的表达水平增多(P<0.001).real-time PCR的验证结论 与芯片一致(t值分别为10.74、32.65、18.34、2.80,P值分别为0.0004、0.0001、0.0001、0.0448).BIRC7的高表达与MAPK8的低表达对应显著减少的生存期(P值分别0.0220、0.0056).结论 BIRC2、BIRC7、ABCC2、MAPK8在对安罗替尼耐药的肝癌细胞中差异表达,可能参与了肝癌细胞对安罗替尼耐药的过程.