沉默促癌基因Yap1联合丹参酮ⅡA对肝癌细胞Huh-7的影响

摘要

目的 研究基因Yap1与丹参酮ⅡA对肝癌细胞Huh-7增殖、迁移侵袭的影响.方法 选用武汉大学中南医院10对人肝细胞癌及癌旁组织标本,收集时间2019年6月1日—2019年12月1日.实时荧光定量法和蛋白质印迹法用于检测基因Yap1的表达以及表型相关分子的变化.采用MTT细胞增殖检测试剂检测不同浓度丹参酮ⅡA处理后细胞的增殖抑制率.蛋白质印迹实验检测不同干预下细胞凋亡、迁移相关标志物表达变化.流式细胞检测和Transwell实验分别检测细胞凋亡和细胞迁移以及侵袭.计量资料两组间比较采用t检验;计数资料两组间比较采用χ2检验.结果 10对人肝癌组织标本中有8对Yap1的表达明显高于癌旁组织.相对于人正常肝上皮细胞L02,Yap1在肝癌细胞株Huh-7和HCCL-M3中表达增高.si-Yap1-3转染细胞蛋白水平沉默效率达87.004％.MTT结果 显示丹参酮ⅡA能够有效抑制Huh-7细胞增殖,其半数抑制浓度为8.683μmol/L.si-Yap1-3与丹参酮ⅡA联合处理Huh-7肝癌细胞,下游增殖迁移标志物E-钙粘蛋白表达增加,波形蛋白表达降低.Transwell实验结果 示,相较于si-NC组,丹参酮ⅡA联合si-Yap1-3处理组细胞迁移、侵袭能力明显降低(43.19±2.88 vs 132.20±10.03,t=8.527,P=0.001;53.95±4.20 vs 179.10±11.11,t=4.484,P=0.011).si-Yap1-3与丹参酮ⅡA联合处理组细胞凋亡相关标志物Bax表达增加,Bcl-2蛋白表达降低,且联合处理组细胞早期凋亡率为25.98％,高于si-NC组的9.21％(χ2=4.078,P<0.05).结论 沉默促癌基因Yap1联合丹参酮ⅡA能够促进肝癌细胞Huh-7凋亡,并抑制其迁移侵袭,为临床用药提供一定的指导意义.