复方茵丹汤对急性肝内胆汁淤积大鼠肝组织法尼醇受体及多耐药相关蛋白3表达的影响

摘要

目的 研究复方茵丹汤对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的大鼠急性肝内胆汁淤积的作用机制.方法 将108只雄性SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,中药复方茵丹汤高、中、低剂量组和阳性药对照组,每组18只,依据取材时间不同又将各组随机分为24、48、72h3个亚组,每组6只.模型组、中药组、阳性药对照组大鼠一次性给予2％ ANIT按100 mg· kg-1·d-1灌胃造模,正常对照组予等容积色拉油灌胃.造模2h后,中药高、中、低剂量组分别给予生药含量为24.48 9·kg-1·d-1、12.24 9·kg-1·d-1和6.12 g· kg-1·d-1的复方茵丹汤中药煎剂1 ml/100 9体质量灌胃,模型组和正常对照组给予等容积生理盐水灌胃,阳性药对照组给予67.5 mg·kg-1·d-1熊去氧胆酸(UDCA)水溶液1 ml/100 9体质量灌胃,均1次/d.造模后分别于24、48、72 h处死相应时相大鼠,采用RT-q-PCR、Western Blot和免疫组化技术检测法尼醇受体(FXR)及多耐药相关蛋白3(MRP3)在大鼠肝组织的表达水平.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 RT-q-PCR结果显示,与同时相正常组比较,模型组FXR mRNA表达均明显降低(P值均＜0.05);与同时相模型组比较,中药各剂量组及UDCA组FXR mRNA表达明显升高(P值均＜0.05);中药高剂量组各时相FXR mRNA表达明显高于中、低剂量组(P值均＜0.05).与同时相正常组比较,模型组MRP3mRNA表达均显著升高(P值均＜0.05);与同时相模型组比较,除低剂量组24 h外,中药各剂量组及UDCA组MRP3mRNA表达均明显升高(P值均＜0.05);中药高剂量组48 h、72 h的MRP3 mRNA表达均明显高于中、低剂量组(P值均＜0.05).免疫组化结果显示,与同时相正常组比较,模型组FXR蛋白表达均显著降低(P值均＜0.05);与模型组比较,24 h中药各剂量组及各时相UDCA组FXR蛋白表达均显著升高(P值均＜0.05);中药高剂量组FXR蛋白表达明显高于同时相中、低剂量组和模型组(P值均＜0.05).与同时相正常组比较,模型组MRP3蛋白表达显著升高(P值均＜0.05);与同时相模型组比较,除低剂量24h外,中药各剂量组及UDCA组MRP3蛋白表达明显升高(P值均＜0.05);中药高剂量组MRP3蛋白表达显著高于同时相低剂量组及72 h中剂量组(P值均＜0.05).Western Blot结果显示,与同时相正常组比较,模型组FXR蛋白表达均显著降低(P值均＜0.05);与同时相模型组比较,中药各剂量组及UDCA组FXR蛋白表达均显著升高(P值均＜0.05);中药高剂量组FXR蛋白表达均显著高于同时相中、低剂量组(P值均＜0.05).与同时相正常组比较,模型组MRP3蛋白表达均显著升高(P值均＜0.05);与模型组比较,48 h及72 h中药中、高剂量组及UDCA组MRP3蛋白表达均明显升高(P值均＜0.05);中药高剂量组48 h和72 h的MRP3蛋白表达均高于相应的中、低剂量组(P值均＜0.05).结论 复方茵丹汤对ANIT灌胃诱导AIC大鼠的治疗作用可能与其上调FXR和MRP3基因、蛋白表达有关.