CDK2、p21和p27在生长激素腺瘤中的表达及CDK2抑制剂的体外应用

摘要

cqvip:目的分析细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期调节因子p21和p27在生长激素腺瘤中的表达水平,观察CDK2抑制剂环O6-己基甲基鸟嘌呤(O6)对GH3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法构建包含3例垂体和46例腺瘤标本的组织芯片,按Knosp分级将肿瘤分为侵袭组(n=15)和非侵袭组(n=31),免疫组织化学技术分析CDK2、p21和p27的蛋白水平,结合随访信息分析其与临床特性的关系。GH3细胞分为O6组(0.4μmol/L和4μmol/L)和二甲基亚砜组(DMSO),细胞增殖实验MTS法检测细胞活力;Annexin V实验检测细胞凋亡;Brdu实验检测细胞周期,Western blotting实验检测CDK2、p21和p27变化。结果腺瘤标本中CDK2、p21和p27的H-score评分分别为(104.8±28.3)分、(195±39.2)分、(158.8±32.3)分,CDK2在侵袭组表达较非侵袭组明显增高[(140±31.7)分vs.(87.8±26.7)分],p21[(152.3.1±35.2)分vs.(215.7±41.2)分]和p27[(118.1±28.4)分vs.(173.7±34.3)分]则明显降低(P<0.05)。O6处理GH3细胞后,细胞活力与DMSO组相比,不同剂量O6处理组细胞活力分别为DMSO组的(84.5±7.6)%和(76.2±7.1)%(24 h)、(75.7±7.3)%和(69.6±6.2)%(48 h)、(70.2±6.4)%和(61.3±5.5)%(72 h)。处理24 h后,O6组Annexin V阳性细胞分别为(8.86±1.78)%(P<0.05)和(19.36±4.20)%(P<0.01),而DMSO组为(3.35±0.73)%,PI阳性则分别为(3.82±0.53)%(P<0.05)、(10.14±2.65)%(P<0.01)和(1.34±0.33)%。Brdu实验显示,O6将GH3细胞阻滞在G1期,分别为(50.4±4.1)%和(59.4±4.7)%(P<0.05),DMSO组为(45.7±3.7)%。同时,蛋白印迹实验显示,O6处理后p21和p27呈现升高趋势(P<0.05)。结论CDK2、p21和p27表达与生长激素腺瘤侵袭密切相关,其抑制剂O6-己基甲基鸟嘌呤诱导GH3细胞凋亡,抑制细胞增殖。