miR-5590-3p介导TGFBR2表达对胃癌细胞HS-746T侵袭和增殖的影响

摘要

目的探讨微小RNA（miR）-5590-3p对转化生长因子βⅡ型受体（TGFBR2）基因表达的抑制作用及对胃癌细胞HS-746T侵袭和增殖的影响。方法体外培养胃癌细胞系,实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌组织和细胞系中miR-5590-3p的表达。采用脂质体转染法分别转染miR-NC和miR-5590-3p模拟物至胃癌细胞HS-746T中,分别命名为miR-5590-3p组和miR-NC组。qRT-PCR检测转染效果。Transwell实验和CCK-8实验检测转染后胃癌细胞HS-746T侵袭和增殖能力。生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因系统验证miR-5590-3p的靶基因。qRT-PCR和Western blot检测转染后细胞中TGFBR2及下游蛋白的表达。结果 miR-5590-3p在胃癌组织的表达明显低于癌旁组织（P＆0.01）。miR-5590-3p在胃癌细胞系的表达明显低于正常胃黏膜上皮细胞（P＆0.05）,在HS-746T细胞中表达最低（P＆0.01）。转染后miR-5590-3p组miR-5590-3p的表达（11.76±0.21）明显高于miR-NC组（1.06±0.21）,差异有统计学意义（P＆0.01）。miR-NC组和miR-5590-3p组侵袭细胞数量分别为（101.20±15.47）个和（26.53±6.53）个,miR-5590-3p组细胞侵袭能力明显下降（P＆0.01）。与miR-NC组比较,miR-5590-3p组细胞增殖能力明显降低（P＆0.05）。生物信息学软件显示miR-5590-3p的靶基因是TGFBR2。双荧光素酶报告基因系统证实miR-5590-3p可靶向结合TGFBR2基因（P＆0.01）。Western blot结果显示,与miR-NC组比较,miR-5590-3p组HS-746T细胞中TGFBR2的表达明显降低（P＆0.01）。肿瘤侵袭相关蛋白ZEB-1、ZEB-2表达降低,细胞周期相关蛋白CDK1和Cyclin B表达降低。结论 miR-5590-3p可通过靶向结合并调控TGFBR2基因的表达,抑制胃癌细胞HS-746T的侵袭和增殖能力。