白及醇提物对PM_(2.5)诱导J774a.1细胞损伤的保护作用

摘要

目的:研究白及醇提物对PM_(2.5)所致J774a.1细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:采用MTS检测不同浓度PM_(2.5)(0、25、50、100、200、400μg/mL)和不同浓度白及醇提物(0、1.25、2.5、5、10、20μg/mL)对J774a.1细胞活力的影响,确定合适的造模浓度和给药浓度。以PM2.5诱导J774a.1细胞损伤,将细胞分为空白对照组、模型组及白及醇提物组物低、中、高浓度组,采用DCFH-DA荧光探针检测活性氧水平;NO试剂盒检测NO的表达量;实时荧光定量PCR法测定促炎介质iNOS、IL-18 mRNA水平;流式细胞术检测炎症因子TNF-α、IL-6水平;Western blot检测TLR4、COX2蛋白表达及NF-κBp65蛋白磷酸化水平。结果:PM_(2.5)浓度为200μg/mL,白及醇提物浓度为5~20μg/mL时,未见明显细胞毒性。与模型组比较,各浓度白及醇提物均可显著降低细胞上清中NO、IL-6、TNF-α释放量及细胞内活性氧水平(P<0.01),5、10μg/mL白及醇提物可显著抑制细胞中iNOS、IL-18 mRNA表达(P<0.05或P<0.01),低浓度白及醇提物可显著抑制胞内TLR4、COX2蛋白表达及NF-κBp65蛋白的磷酸化(P<0.05或P<0.01)。结论:白及醇提物对PM_(2.5)染毒J774a.1细胞损伤有显著的保护作用,其作用机制可能与TLR4/NF-κB通路相关,通过减轻细胞炎症损伤及氧化应激发挥药效。