体外重组CaV1.2不同蛋白片段纯化及其与CaM相互作用的研究

摘要

目的 纯化CaV1.2不同蛋自片段并研究其与CaM的相互作用.方法 质粒转化、筛选得到转化成功BL21菌株,利用IPTG诱导GST钙通道融合蛋白表达,Glutathione-Sepharose 4B beads纯化钙通道不同蛋白片段；采用GST pull-down assay实验研究钙通道蛋白不同片段与CaM以及突变体的相互作用.结果 SDS-PAGE结果显示成功纯化获得钙通道不同蛋白片段；GST pull-down assay结果显示CT1可与CaM及突变体结合,且GST-CT1与野生型CaM结合量显著多于与突变体CaM结合量.结论 成功纯化CaV l.2钙通道蛋白片段并顺利完成GST pull-down assay实验,为深入研究蛋白相互作用或发现新的蛋白相互作用奠定了基础.