鸡的KLF11基因真核表达载体的构建及其在LMH细胞中的表达

摘要

KLF11是Kruppel样转录因子家族中的成员,在羧基端具有3个串联的C2H2锌指结构,其在胰腺、肌肉、肝脏等多种组织中广泛表达.本研究采用Trizol法提取鸡肝脏组织总RNA,经RT-PCR方法扩增鸡的LKLF 11的CDS区,构建鸡KLF11的重组表达载体;将重组质粒转染至LMH细胞内,Western Blot检测目的蛋白的过表达情况;采用实时荧光定量PCR,检测过表达KLF11基因后对糖脂代谢的相关基因FAS、INS、乙酰辅酶A羧化酶基因(ACC)、PPARγ以及SREBP-1c表达的影响.结果表明,构建的pCMV-3Tag-9-KLF11表达载体,在LMH细胞中成功表达;与空白对照相比,过表达KLF11基因使得LMH细胞中PPARγ的表达量有上升趋势,INS、ACC的表达量有下降趋势,FAS、SREBP-1c的表达量均没有明显的变化.本研究成功实现鸡KLF11在LMH细胞中的过表达,为进一步研究KLF11基因在鸡机体中发挥的功能奠定基础.