醛酮还原酶AKR7A3原核表达条件的优化及酶学活性检测

摘要

AKR7A3属醛酮还原酶是NADPH依赖型的氧化还原酶超家族的一员,参与人体内很多极为重要的生理活动.本文构建原核表达载体,优化表达条件,获得可溶性好、活性高的AKR7A3属醛酮还原酶.研究了温度、转速、诱导时间和IPTG浓度等不同条件对AKR7A3酶表达量的影响,并进行了酶活性动力学检测分析.在16℃、110rpm/min、20h、1.00mM/L诱导剂浓度时AKR7A3可溶性蛋白达到99.0％.酶活性动力学检测结果说明在37℃;PH=7.0;NADPH浓度2mmol/L;底物浓度在2.00mmol/L;加酶量100μL时酶活性最好,最佳反应底物为睾丸酮.成功在大肠杆菌中表达出高活性的可溶性酶蛋白,并获得了体外酶活性的最佳动力学条件,为后续AKR7A3基础研究和应用研究提供实验基础.