HCV IRES调控外分泌性碱性磷酸酶基因在肝细胞中的表达

摘要

目的:构建HCV IRES调控外分泌性碱性磷酸酶(SEAP)基因表达的细胞模型.方法:用PCR技术扩增HCV 5′NCR片段,定向克隆至表达质粒pSEAP2-Control的SEAP基因上游,构建HCV 5′NCR调控SEAP表达的重组质粒pdNCRSEAP.用脂质体基因转染技术,将pdNCRSEAP转染至肝细胞株QSG7701.用化学发光法检测SEAP的表达,并观察不同浓度反义寡聚核苷酸(ASODN)对SEAP表达的影响.结果:重组质粒pdNCRSEAP表达的发光强度为pSEAP2-Control的76%,5 μmol和10 μmol ASODN对pdNCRSEAP发光强度的抑制率分别为29.2%和44.6%, 而对pSEAP2-Control的SEAP表达无显著抑制作用(P>0.05) 结论:重组质粒pdNCRSEAP 的SEAP表达受HCV 5′NCR调控,为以HCV 5′NCR为靶位点的药物评价建立了检测方便的细胞模型.