TGF-β1刺激对人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路的影响

摘要

目的:探讨人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路在TGF-β1致腹膜纤维化过程中是否发挥作用.方法:取健康成年人大网膜进行人腹膜间皮细胞原代培养,经鉴定95%以上为人腹膜间皮细胞.用5 ng/ml TGF-β1刺激第三代培养细胞,采用免疫组织化学染色、Western blotting,ELISA以及RT-PCR等方法,分别观察人腹膜间皮细胞内磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)的蛋白表达以及在细胞内的迁移;细胞内Smad7的蛋白和mRNA表达;细胞外纤维连接蛋白(FN)的蛋白、细胞内FN的mRNA以及细胞内I型胶原(COL1)的蛋白和mRNA表达.结果:人腹膜间皮细胞内p-Smad2/3的蛋白表达在TGF-β1刺激后15 min即开始显著增加,此时p-Smad2/3的阳性细胞率为29%,细胞着色主要分散在细胞质中,30 min阳性细胞率81%至1 h阳性细胞率84%增加最明显,细胞着色加深且集中在细胞核及周边,2 h蛋白表达明显回落,此时阳性细胞率为37%,细胞着色转淡并又分散至细胞质中;细胞内Smad7的蛋白表达在TGF-β1刺激后24 h明显增加,48 h时达高峰,mRNA表达呈时间依从性增强;细胞外FN的蛋白、细胞内FN的mRNA以及细胞内COL1的蛋白和mRNA表达从TGF-β1刺激后24 h起均明显增加,且均显示一定的时间依从性.结论:人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路能被TGF-β1特异性激活,并在TGF-β1致腹膜纤维化过程中发挥效应;经TGF-β1刺激后,在该通路中主要起抑制作用的Smad7蛋白和mRNA表达均反馈性增加.