免疫-PCR实验技术条件的探讨

摘要

@@ ELISA是免疫学检测经典实验技术,多年来已广泛用于检测各种疾病,其检测抗原/抗体的灵敏度可达pg级.但对于早期、轻症患者及产生抗体滴度较低的疾病,其检测阳性率仍不能令人满意.1992年Sano等创立了免疫-PCR方法[1],此方法将ELISA反应的灵敏度至少提高了103倍,可检测到0.5 fg的小鼠ApoE抗原.然而我们在应用中发现,由于免疫-PCR反应需在0.5 mL小离心管中进行,而离心管的包被效果远逊于ELISA反应板(酶标板),制约了免疫-PCR灵敏度优势的发挥.为克服这一难题,我们分别观察了硅化、紫外线照射、戊二醛浸泡以及增大抗原质量浓度4种处理方法对包被效果的影响.