人杀伤抑制性受体CD158bcDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要

目的:CD158b基因克隆与表达.方法:采用RT-PCR技术,从正常人外周血单个核细胞中扩增编码CD158b的cDNA,经酶切后将其克隆于pMBP-c表达质粒上,酶切和测序鉴定.构建的高效表达克隆子经IPTG诱导后,表达的重组蛋白经SDS-PAGE电泳分析.结果:RT-PCR获得了预期大小的cDNA,DNA测序结果与GenBank登记的人CD158b编码序列一致.pMBP-c-CD158b表达质粒酶切后结果与预期相符.表达的重组蛋白经SDS-PAGE电泳分析,得到分子量为58 kD的蛋白质,与理论值一致,所获重组蛋白占菌体总蛋白25%.结论:获得了CD158b基因,并成功在大肠杆菌中表达,所获重组蛋白为进一步研究CD158的功能打下了基础.