逆转录聚合酶链式反应

摘要： [背景]病毒可以随同草莓无性繁殖材料传播扩散,导致产量和品质下降.选育无病毒种苗是草莓病毒病防治的主要措施,高效、灵敏的检测技术可为草莓病毒病防治提供技术保障.[目的]为明确8种能够侵染草莓的病毒在北京地区设施草莓上的发生情况,应用酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)进行检测.[方法]将待检病毒的阳性对照样品分别进行间接法和双抗夹心法(Double-Antibody Sandwich,DAS) ELISA检测,以空白对照和阴性对照作参照比较,确定应用DAS-ELISA检测体系结合田间症状对北京地区采集的草莓样品进行病毒检测,并利用逆转录-聚合酶链式反应和序列测定方法对阳性样品进一步验证,确定检测结果的可靠性.[结果]侵染北京地区设施草莓的病毒为草莓轻型黄边病毒(Strawberry Mild Yellow Edge Virus,SMYEV).'红颜'品种的病毒检出率为8.1％,'天香'品种的检出率为2.7％,其他品种均未检出病毒.[结论]研究结果为北京地区设施草莓病毒的检测以及草莓病毒病的科学防治提供理论依据.

摘要： cqvip:现有的大多数严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-Co V-2)的诊断检测依赖于RNA提取,然后进行定量逆转录聚合酶链式反应(RT-q PCR)分析。虽然检测中采用自动化技术改进了工序效率,应用不同的样品混和策略提高了检测能力,但在一次试验中对多个变异进行定量和测序的能力依然不足。Chappleboim等描述了一种基于多重二代测序(NGS)的方法,称为Aphar Seq,将为解决这一问题提供新的思路。

摘要： 了解新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的病原学特点及高效快速的病毒核酸检测方法对有效控制新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的传播至关重要。本文主要对SARS-CoV-2的病原学特点进行了阐述,以本院成为新型冠状病毒定点核酸检测单位后接诊的首批7例核酸检测患者为例阐述逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法及介绍一种快速、灵敏的核酸检测方法-LAMP。旨在为快速确诊病例及基层医院、实验室的核酸检测提供参考。

摘要： 目的 探讨三阴性乳腺癌(TNBC)组织miR-490、twist表达与血管生成拟态(VM)的相关性.方法 收集TNBC组织标本126例为TNBC组,乳腺良性肿瘤组织标本57例为乳腺良性肿瘤组.采用CD31/PAS双重染色法检测VM表达,并分析VM与TNBC临床特征的关系.采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测miR-490表达,采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法(SP法)检测twist蛋白表达,分析miR-490、twist表达与VM的相关性.结果 TNBC组VM阳性表达率和twist蛋白阳性表达率均高于乳腺良性肿瘤组,miR-490的表达量明显低于乳腺良性肿瘤组,差异均有统计学意义(χ2分别=19.57、29.17,U=13.11,P均<0.05).TNBC组患者中肿瘤≥2 cm、TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移的VM阳性表达率高于肿瘤<2 cm、Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(χ2分别=6.24、10.33、9.57,P均<0.05).Spearmen秩相关结果显示,TNBC组织中miR-490表达水平与VM阳性呈负相关(r=-0.45,P<0.05),TNBC组织中twist蛋白表达与VM阳性呈正相关(r=0.31,P<0.05).结论 TNBC组织中存在VM,VM与TNBC的发展转移密切相关.miR-490是一个潜在的抑癌miRNA,miR-490表达下调可能促进VM形成.twist在TNBC组织中过表达,可能在VM中发挥重要作用.

摘要： 目的:研究红芪Hedysari Radix次生代谢产物与基因表达的相关性,克隆红芪的肌动蛋白基因(actin)并进行序列分析和定量研究.方法:通过查找GenBank中的其他豆科植物的编码序列(CDS)设计简并引物,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术克隆红芪actin基因的核心片段,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析该基因在不同部位中的稳定性表达.结果:克隆出了长度946 bp的红芪actin基因,其中编码蛋白框855 bp,编码284个氨基酸,经Blast比对序列,红芪的actin基因与甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、花苜蓿Medicago ruthenica(L.)Trautv.、红车轴草Trifolium pratense L.的核苷酸序列同源性分别为95.44％、94.42％、94.20％,氨基酸序列的相似性也高达97％以上,红芪actin基因在根、茎、叶不同部位中的表达量基本稳定.结论:首次在国内成功克隆出了红芪的actin基因,并且证实了该基因可作为红芪其他优良基因表达调控的内参基因,为红芪质量研究提供参考.

摘要： 目的 检测食管鳞癌组织中B、T淋巴细胞弱化因子(B and T lymphocyte attenuators,BTLA)的mRNA表达水平,研究食管鳞癌中BTLA的表达水平与患者临床病理的关系.方法 利用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription?polymerase chain reaction,RT?PCR)方法,分别检测食管鳞癌和对照组织中BTLA mRNA的表达量.结果 食管鳞癌标本中BTLA mRNA的表达高于对照组[(8.8±2.6)×104(拷贝/μg RNA)vs.(9.2±3.4)×103(拷贝/μg RNA)],差异有统计学意义(P0.05).结论 本研究发现BTLA在食管鳞癌组织中表达增高,且与患者的TNM分期和淋巴结转移明显相关,BTLA在食管癌发展过程中可能具有重要意义.

摘要： 目的:探讨母血、脐血补体C1q/肿瘤坏死因子3(CTRP3)水平及胎盘组织中CTRP3mRNA表达量与新生儿出生体重的相关性,分析CTRP3的影响因素。方法:选取足月分娩出生体重≥4000g新生儿的产妇31例作为巨大儿组,分娩正常出生体重儿的产妇31例作为出生体重正常组,收集母体静脉血、脐静脉血及胎盘组织。酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清CTRP3水平,反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测胎盘组织CTRP3mRNA表达。分析上述检测指标与新生儿出生体重及巨大儿的相关性。结果:巨大儿组与正常组脐血的CTRP3水平分别为(102.2±23.7)ng/ml和(70.9±26.0)ng/ml,差异有统计学意义(t=4.955,P<0.001);两组母血的CTRP3水平比较差异无统计学意义[(107.5±18.3)ng/mlvs(108.8±20.0)ng/ml,t=0.256,P=0.799]。新生儿出生体重与脐血CTRP3水平有相关性(r=0.599,P<0.001),与母血CTRP3水平无相关性(r=0.020,P=0.876)。多元线性回归分析显示,是否分娩巨大儿(P<0.001)、分娩孕龄(P=0.034)是脐血CTRP3的独立影响因素。巨大儿组胎盘组织中CTRP3mRNA表达量显著高于正常组(P<0.001)。结论:脐血CTRP3水平与巨大儿的发生有关,母血CTRP3水平与巨大儿的发生不具有相关性。胎盘组织中CTRP3mRNA表达上调与巨大儿发生有关。巨大儿、分娩孕龄是脐血CTRP3水平的独立影响因素。

摘要： 目的 探讨膀胱癌组织中线粒体融合蛋白2(MFN2)基因和蛋白的表达及其与临床特征的关系.方法 选取80例膀胱癌患者的术后膀胱癌组织标本为膀胱癌组,选取40例行手术切除的外伤患者的正常膀胱组织标本为对照组.采用免疫组织化学法检测两组标本中MFN2蛋白的表达情况;采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测两组标本中MFN2 mRNA的表达水平;分析MFN2蛋白表达与膀胱癌患者临床特征的关系.结果 膀胱癌组织中MFN2蛋白的阳性表达率、MFN2 mRNA的相对表达量均明显高于正常膀胱组织(P0.05).结论 膀胱癌组织中MFN2基因和蛋白的表达均明显上调,且MFN2蛋白的表达与膀胱癌患者的临床特征有关.

摘要： 目的:探讨乳腺癌转移抑制基因1(BRMS1)mRNA在结直肠癌组织中的表达及临床意义.方法:采用RT-PCR法分别检测40例结直肠癌组织和20例正常结直肠组织中BRMS1 mRNA的表达,并分析其与各临床病理特征之间的关系.结果:BRMS1 mRNA在结直肠癌组织中低表达0.420±0.133,在正常结直肠组织中高表达0.836±0.102,差异有统计学意义(P0.05),而与淋巴结转移呈负相关关系(P<0.01).结论:BRMS1 mRNA在结直肠癌组织中呈低表达,并有可能成为反映结直肠癌转移潜能的参考指标之一.

摘要： 目的：建立快速多重检测人不同亚型的副流感病毒荧光定量RT-PCR方法.方法：根据GeneBank数据库中人不同亚型的副流感病毒毒株的HN基因核苷酸序列,通过VectorNTIExplorer生物学软件进行同源性分析,选出高度保守序列,并用Primer express3设计引物和TaqMan探针,建立并优化PCR多重反应体系.结果：建立具有高度灵敏度和特异度的人副流感病毒的荧光定量RT-PCR多重检测方法,人副流感病毒多重检测反应的灵敏度为0.058TCID50.结论：本研究建立荧光定量RT-PCR方法可以快速多重检测人不同亚型的副流感病毒,可以用于临床检测和诊断.

摘要： 目的：建立快速多重检测人不同亚型的副流感病毒荧光定量RT-PCR方法.方法：根据GeneBank数据库中人不同亚型的副流感病毒毒株的HN基因核苷酸序列,通过VectorNTIExplorer生物学软件进行同源性分析,选出高度保守序列,并用Primer express3设计引物和TaqMan探针,建立并优化PCR多重反应体系.结果：建立具有高度灵敏度和特异度的人副流感病毒的荧光定量RT-PCR多重检测方法,人副流感病毒多重检测反应的灵敏度为0.058TCID50.结论：本研究建立荧光定量RT-PCR方法可以快速多重检测人不同亚型的副流感病毒,可以用于临床检测和诊断.

摘要： 目的：建立快速多重检测人不同亚型的副流感病毒荧光定量RT-PCR方法.方法：根据GeneBank数据库中人不同亚型的副流感病毒毒株的HN基因核苷酸序列,通过VectorNTIExplorer生物学软件进行同源性分析,选出高度保守序列,并用Primer express3设计引物和TaqMan探针,建立并优化PCR多重反应体系.结果：建立具有高度灵敏度和特异度的人副流感病毒的荧光定量RT-PCR多重检测方法,人副流感病毒多重检测反应的灵敏度为0.058TCID50.结论：本研究建立荧光定量RT-PCR方法可以快速多重检测人不同亚型的副流感病毒,可以用于临床检测和诊断.

摘要： 禽流感是由A型流感病毒引起的一种人和动物共患病,能引发禽类呼吸道疾病、导致产蛋下降,发生急性死亡,是一种烈性传染病,给养禽业带来巨大损失,而且可以导致人感染.由于其危害严重,如何快速、准确的诊断对于禽流感的防控显得非常重要.与常规的临床诊断、病毒分离鉴定、血清学检测方法比较,分子生物学检测方法具有更加快速、准确的特点.

摘要： 禽流感是由A型流感病毒引起的一种人和动物共患病,能引发禽类呼吸道疾病、导致产蛋下降,发生急性死亡,是一种烈性传染病,给养禽业带来巨大损失,而且可以导致人感染.由于其危害严重,如何快速、准确的诊断对于禽流感的防控显得非常重要.与常规的临床诊断、病毒分离鉴定、血清学检测方法比较,分子生物学检测方法具有更加快速、准确的特点.

摘要： 禽流感是由A型流感病毒引起的一种人和动物共患病,能引发禽类呼吸道疾病、导致产蛋下降,发生急性死亡,是一种烈性传染病,给养禽业带来巨大损失,而且可以导致人感染.由于其危害严重,如何快速、准确的诊断对于禽流感的防控显得非常重要.与常规的临床诊断、病毒分离鉴定、血清学检测方法比较,分子生物学检测方法具有更加快速、准确的特点.

摘要： 禽流感是由A型流感病毒引起的一种人和动物共患病,能引发禽类呼吸道疾病、导致产蛋下降,发生急性死亡,是一种烈性传染病,给养禽业带来巨大损失,而且可以导致人感染.由于其危害严重,如何快速、准确的诊断对于禽流感的防控显得非常重要.与常规的临床诊断、病毒分离鉴定、血清学检测方法比较,分子生物学检测方法具有更加快速、准确的特点.

摘要： 本研究采用RT-PCR方法结合荧光探针的扩增检测技术，通过荧光信号的变化检测猪瘟病毒RNA通过相对定量对比各批次间猪瘟疫苗的抗原含量。猪瘟(Classical swine fever, CSFV)是一种高度接触性传染病，遍布于全世界。为有效检测使用猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量,给养殖户选择高效疫苗提供科学指导.本研究收集福建省内使用的10个不同厂家的23个批次猪瘟疫苗,应用实时荧光定量RT-PCR方法检测疫苗中病毒核酸的含量,以其中的标准品对照,比较相应的兔体反应量.结果表明:抽检23个猪瘟疫苗样品合格率仅为69.56％,传代细胞苗的病毒含量相对较高,脾淋苗病毒含量优于细胞苗;不同厂家生产的同类型疫苗病毒含量差异大,同一厂家生产的同类疫苗存在批间差异.实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟疫苗病毒含量是一种便捷、高效的方法,为今后临床猪瘟疫苗的使用提供有效指导依据.为猪瘟病毒的病毒含量测定及猪瘟疫苗效力检验提供了新的技术支持。

摘要： 本研究采用RT-PCR方法结合荧光探针的扩增检测技术，通过荧光信号的变化检测猪瘟病毒RNA通过相对定量对比各批次间猪瘟疫苗的抗原含量。猪瘟(Classical swine fever, CSFV)是一种高度接触性传染病，遍布于全世界。为有效检测使用猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量,给养殖户选择高效疫苗提供科学指导.本研究收集福建省内使用的10个不同厂家的23个批次猪瘟疫苗,应用实时荧光定量RT-PCR方法检测疫苗中病毒核酸的含量,以其中的标准品对照,比较相应的兔体反应量.结果表明:抽检23个猪瘟疫苗样品合格率仅为69.56％,传代细胞苗的病毒含量相对较高,脾淋苗病毒含量优于细胞苗;不同厂家生产的同类型疫苗病毒含量差异大,同一厂家生产的同类疫苗存在批间差异.实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟疫苗病毒含量是一种便捷、高效的方法,为今后临床猪瘟疫苗的使用提供有效指导依据.为猪瘟病毒的病毒含量测定及猪瘟疫苗效力检验提供了新的技术支持。

摘要： 本研究采用RT-PCR方法结合荧光探针的扩增检测技术，通过荧光信号的变化检测猪瘟病毒RNA通过相对定量对比各批次间猪瘟疫苗的抗原含量。猪瘟(Classical swine fever, CSFV)是一种高度接触性传染病，遍布于全世界。为有效检测使用猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量,给养殖户选择高效疫苗提供科学指导.本研究收集福建省内使用的10个不同厂家的23个批次猪瘟疫苗,应用实时荧光定量RT-PCR方法检测疫苗中病毒核酸的含量,以其中的标准品对照,比较相应的兔体反应量.结果表明:抽检23个猪瘟疫苗样品合格率仅为69.56％,传代细胞苗的病毒含量相对较高,脾淋苗病毒含量优于细胞苗;不同厂家生产的同类型疫苗病毒含量差异大,同一厂家生产的同类疫苗存在批间差异.实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟疫苗病毒含量是一种便捷、高效的方法,为今后临床猪瘟疫苗的使用提供有效指导依据.为猪瘟病毒的病毒含量测定及猪瘟疫苗效力检验提供了新的技术支持。

摘要： 本发明涉及生物技术领域。一种牙鲆弹状病毒的逆转录-聚合酶链式反应检测方法，牙鲆弹状病毒的逆转录-聚合酶链式反应快速检测方法，首先设计特异性引物，然后提取待测样品的RNA，再进行逆转录-聚合酶链式反应，最后通过琼脂糖凝胶电泳进行结果判定。本发明具有快速，准确、特异性好、灵敏度高的优点，适合对牙鲆弹状病毒的快速检验检疫，可以应用于水产养殖场以及检验检疫部门，应用前景广泛。

摘要： 本发明涉及一种百合病毒的多重逆转录-聚合酶链反应快速检测方法，通过设计并合成百合潜隐病毒(LSV)、百合花叶斑驳病毒(LMoV)、百合黄瓜花叶病毒(CMV)全序列引物，并对三种引物的浓度、三重PCR扩增温度、扩增时间和循环次数等条件进行优化，把3对引物加入同一个反应体系，就能从病毒模板中分别扩增出这3种百合病毒条带，达到一次PCR扩增就可检测出此3种病原的目的，为生物技术领域的病毒检测方法开辟了一条准确、高效、快捷的新途径，同时有效降低了百合病毒检测成本，加快了检测速度，拓宽了检测深度及广度，实现了百合病毒分子多重快速检测的高效性、灵敏性和特异性。具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明涉及一种用于热启动逆转录反应的组合物，和包括相同物质的用于逆转录PCR的组合物。更特别地涉及一种通过在单个反应管中向水溶液添加焦磷酸酯和焦磷酸酶而获得的反应组合物，所述水溶液含有反应缓冲液、MgCl

摘要： 本文提供了用于快速检测样品中的RNA的方法。所述方法包括提供含有所述样品、扩增试剂和具有RNA依赖性聚合酶活性和DNA依赖性聚合酶活性两者的聚合酶的反应混合物；通过孵育不超过5分钟的逆转录时间将所述RNA逆转录成DNA；以及通过执行包括多个扩增循环的热循环方案来扩增所述DNA，其中每个扩增循环至少包括变性步骤和退火步骤。

摘要： 一种装置，其利用集成方法用于进行基于逆转录聚合酶链式反应（RT‑PCR）和/或阵列的分析，所述分析涉及信号产生剂（金纳米簇），包括选择性地用DNA和蛋白质作为模板进行基于加热和冷却循环的合成。本发明进一步涉及一种适于基于共用检测剂进行基于RT‑PCR和阵列的基因和蛋白质表达分析的便携式装置，所述分析涉及原位合成金纳米簇的发光，所述装置用于用户友好地适应图形用户界面（GUI）以控制、可视化和分析数据。

摘要： 本发明属于生物医学临床分子检测领域，具体涉及一种应用于荧光PCR平台的多重逆转录聚合酶链式反应检测试剂的缓冲液及其应用。其特征在于所述缓冲液中包含PCR反应增强剂二甲基亚砜、稳定剂海藻糖。本发明优化了RT‑PCR实验的PCR缓冲液，特别是加入了一定剂量的PCR反应增强剂和稳定剂，对于一步法RT‑PCR反应中的逆转录反应效率和DNA扩增检测反应效率有很大程度的提高，能够同时满足RNA逆转录反应和荧光PCR反应的高效率进行。

摘要： 本发明提供用于检测人上呼吸道病毒感染的多重单管逆转录聚合酶链式反应检测咽拭子上呼吸道感染病毒检测试剂盒和方法，根据RT‑PCR原理，在实时荧光定量PCR技术平台上实现两管多重单管逆转录聚合酶链式反应同时检测6种呼吸道病毒类型。

摘要： 一种装置，其利用集成方法用于进行基于逆转录聚合酶链式反应（RT‑PCR）和/或阵列的分析，所述分析涉及信号产生剂（金纳米簇），包括选择性地用DNA和蛋白质作为模板进行基于加热和冷却循环的合成。本发明进一步涉及一种适于基于共用检测剂进行基于RT‑PCR和阵列的基因和蛋白质表达分析的便携式装置，所述分析涉及原位合成金纳米簇的发光，所述装置用于用户友好地适应图形用户界面（GUI）以控制、可视化和分析数据。

摘要： 本发明属于生物医学临床分子检测领域，具体涉及一种应用于荧光PCR平台的多重逆转录聚合酶链式反应检测试剂的缓冲液及其应用。其特征在于所述缓冲液中包含PCR反应增强剂二甲基亚砜、稳定剂海藻糖。本发明优化了RT‑PCR实验的PCR缓冲液，特别是加入了一定剂量的PCR反应增强剂和稳定剂，对于一步法RT‑PCR反应中的逆转录反应效率和DNA扩增检测反应效率有很大程度的提高，能够同时满足RNA逆转录反应和荧光PCR反应的高效率进行。

摘要： 本发明公开了一步法荧光探针实时定量逆转录聚合酶链式反应定量检测汉滩病毒载量的方法，该方法利用汉滩病毒的体外转录S全长片段作为定量检测标准品，通过检测病毒基因序列引物及探针的设计及方法的选择，建立一步法荧光探针实时定量逆转录聚合酶链式反应方法，来定量检测肾综合征出血热患者血浆或其他体液及组织的汉滩病毒载量。与常规PCR检测方法相比，具有标本检测操作步骤少，灵敏度高，并且具有良好的线性关系，实验表明本发明检测方法具有良好的特异性和重复性，将为肾综合征出血热的科学研究与防治提供有力工具。