蛋白激酶D1对Aβ诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的调节作用

摘要

目的 探究蛋白激酶D1(PKD1)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的阿尔茨海默病(AD)细胞模型的调节作用和分子机制.方法 分别以0、10、20、30、40、50μmol·L-1的Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞24 h,流式细胞术检测细胞凋亡,MTT检测细胞活力,蛋白印迹法(Western blotting)检测PKD1蛋白水平变化.在AD细胞模型中分别过表达和干扰PKD1,流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧(ROS),Western blotting检测凋亡相关蛋白(B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和B细胞淋巴瘤/白血病-xl(Bcl-xL))、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(P-JNK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK 1/2)、磷酸化JAK激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号传导及转录激活蛋白3(p-STAT3)及其下游靶基因c-Myc的蛋白水平变化.过表达PKD1同时添加10μmol·L-1 FLLL32(JAK2/STAT3通路抑制剂)处理AD细胞模型,流式细胞术检测细胞凋亡和ROS,Western blotting检测Bcl-2、Bcl-xL、P-JNK和P-ERK 1/2蛋白水平变化.结果 30μmol·L-1 Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞,细胞存活率和凋亡率分别约为70％和20％(P<0.05),为构建AD模型的最适浓度.过表达PKD1抑制Aβ25-35诱导的细胞凋亡增加、ROS升高、Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达下调、P-JNK和P-ERK 1/2蛋白表达上调;干扰PKD1,加剧Aβ25-35对细胞的毒性作用.过表达PKD1,P-JAK2、P-STAT3和C-Myc蛋白表达上调;干扰PKD1,p-JAK2、p-STAT3和c-Myc蛋白表达下调.FLLL32处理抑制PKD1对AD细胞模型的作用.结论 Aβ诱导SH-SY5Y神经细胞中P-JAK2、P-STAT3表达下调和P-JNK和P-ERK 1/2表达上调.过表达PKD1可通过上调p-JAK2、p-STAT3的表达抑制P-JNK和P-ERK 1/2表达,缓解Aβ对细胞的毒性作用.