Dex基于CREB/PGC-1x信号通路调控星形胶质细胞线粒体功能在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

摘要

目的探究右美托咪定(Dex)基于CREB/PGC-1a信号通路调控星形胶质细胞线粒体功能在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法采用改良的Zen--land法制作大鼠脑缺血再灌注损伤(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,分别在造模后评估假手术(Sham)组、脑缺血再灌注模型(MCAO)组,脑缺血再灌注加药(MCA0+Dex)组大鼠神经功能损伤,脑梗死面积,实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白印迹检测环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1a(PGC-1a)的mRNA及蛋白表达;透射电子显微镜检测线粒体形态,免疫荧光法检测星形胶质细胞活性氧物质(RO8)及细胞凋亡。制备氧糖剥夺/复氧(OCD/R)星形胶质细胞模型,分为对照组(Centroal)。溶剂组(OCD/R-Dex0)、低剂量组(0GD/R-Dex-L)、高剂量组(0GD/R-Dex-H),qPCR检测CREB、PCC-1a的mRNA水平,免疫荧光和WB检测CREB、PGC-1a的蛋白表达。在0CGD/R星形胶质细胞模型Dex处理的基础上过表达CREB或PGC-1 a,分为过表达对照组(0E-NC)、过表达CREB组(OE-CREB)、过表达PCC-Ia组(OE-PCC-1a),流式细胞术检测细胞凋亡,探针法检测线粒体ROS水平。结果Dex预处理改善MCAO大鼠神经功能评分,减少脑梗死面积,抑制CREB、PGC-1a表达,改善线粒体形态,抑制细胞凋亡和星形胶质细胞ROS水平。Dex可抑制0CGD/R星形胶质细胞中CREB、PGC-1a的mRNA及蛋白表达水平及线粒体ROS水平。过表达CREB和PGC-1α逆转由Dex诱发的星形胶质细胞ROS水平和细胞调亡抑制。全结论Dex可下调CREB和PGC-1α表达,进而抑制星形胶质细胞ROS水平和细胞凋亡,从而在大鼠脑缺血再灌注损伤中发挥保护功能。