在乳腺癌细胞中构建CRISPR多基因编辑系统

摘要

cqvip:CRISPR多基因编辑系统在动植物中已被广泛应用。为了在乳腺癌细胞中构建一套多基因编辑系统,利用内源性tRNA自剪切特点,将tRNA与小向导RNA(sgRNA)进行串联组合实现基因编辑,并在MCF7乳腺癌细胞中对KLF4、MYC、SOX2和OCT44个转录因子同时调控,在基因水平、蛋白表达以及功能改变3个层次验证该多基因编辑系统的功能性与可靠性。实验结果显示被调控的转录因子在细胞内的表达量提高2倍以上,侵袭能力明显增强,细胞的存活率提高50%,干细胞比例由2.57%提高到18.5%。同时,该系统在SUM149PT细胞系也被验证成功。综上,一套基于CRISPR的标准、精确、可复制、高效、可靠的多基因调控系统首次在乳腺癌细胞中构建成功。