人干扰素ε的基因合成、原核表达及质谱表征

摘要

首先人工合成了人源干扰素ε的基因,经密码子优化后分别构建表达载体Ifn-ε/pET-21a(+)和Ifn-ε/pET-22b(+)。将表达载体转化入大肠埃希菌中表达,优化表达条件筛选出两株优势表达菌Ifn-ε/pET-21a/BL21和Ifn-ε/pET-22b/BL21。通过发酵、提取、纯化,成功地从Ifn-ε/pET-22b/BL21表达菌中得到纯度较高的IFN-ε,通过质谱对其结构进行确证。研究建立了人干扰素ε高效表达体系,为获取大量蛋白进行结构和作用机制研究奠定基础。此外通过基因合成建立的表达体系为后期以表达的方式对蛋白的氨基酸序列进行突变进而研究构效关系奠定基础。