神经酰胺对人γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用

摘要

目的:观察神经酰胺对人γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用.方法:用结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)和CD3单抗(CD3mAb)分别刺激正常人外周血单个核细胞,获得Mtb-Ag激活的T细胞(γδT细胞为主)及CD3mAb激活的T细胞(αβT细胞为主);用不同浓度的神经酰胺(C2-Cer)分别作用于γδT细胞和αβT细胞,培养3 h后收获细胞,应用Annexin-V-FITC/PI染色,流式细胞术检测不同亚群T细胞的凋亡,应用四甲基噻唑氮蓝(MTT)比色法检测T细胞的活性.结果:Mtb-Ag激活的T细胞中γδT细胞比例可达70%～90%,CD3mAb激活的T细胞中αβT细胞比例＞90%;与对照组比较,低浓度的C2-Cer(≤10 μmol/L)对人γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用和细胞活性抑制作用均不明显(P＞0.05);而高浓度的C2-Cer对γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用和细胞活性抑制作用存在显著差异:100 μmol/L的C2-Cer诱导γδT细胞、αβT细胞凋亡比例分别增加10.4%(P＞0.05)及73.5%(P＜0.01),活细胞区(R1区)的细胞比例分别为对照组的88.1%(P＞0.05)和7.8%(P＜0.01);而500 μmol/L时诱导γδT细胞和αβT细胞凋亡比例分别增加71.9%和73.8%(P＜0.01),R1区的细胞比例分别为对照组的36.5%和2.7%(P＜0.01).结论:神经酰胺能诱导活化的人γδT细胞和αβT细胞发生凋亡,诱导γδT细胞发生凋亡所需的C2-Cer浓度明显高于诱导αβT细胞所需浓度.