重排NAD+合成途径提高磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性

摘要

为提高磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的催化活性,构建了两个载体分别表达:（1）磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）;（2）与NAD+合成相关的关键酶,包括烟酸转磷酸核糖激酶（pnc B）、烟酸单核苷酸腺苷酰转移酶（nad D）和NAD+合成酶（nad E）。将这两个载体共转化大肠杆菌,获得重组菌E.coli（p ET-pepc＆p UC-pnc B-nad D-nad E）。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示这些酶均实现了高表达。摇瓶发酵显示,与单独过表达PEPC的重组菌相比,双质粒工程菌的PEPC酶活提高了4.36倍;与野生型大肠杆菌相比,双质粒工程菌的琥珀酸产量提高了4.23倍,达到0.9 g/L,富马酸产量提高了5.23倍,达到5.4 mg/L。上述结果表明加强NAD+合成途径提高了PEPC活性,并增加了还原三羧酸循环的代谢流量。