氯化锂通过JNK信号通路诱导HEI-OC1毛细胞样细胞的凋亡

摘要

目的 探讨氯化锂对HEI-OC1毛细胞样细胞的毒性作用及可能作用机制.方法 首先采用CCK-8试剂盒检测0、25、50、75、100、125、150 mM氯化锂浓度处理12、24、48、72小时对HEI-OC1毛细胞样细胞的抑制作用,计算出IC50的浓度值.然后将对数生长期的HEI-OC1毛细胞样细胞分为对照组(不进行任何干预)和实验组(IC50浓度处理24小时)、DMSO组(溶剂组)和JNK抑制组(这两组仅进行Western blot实验以验证氯化锂是否通过JNK信号通路诱导细胞凋亡);采用TUNEL法和流式细胞术检测对照组和实验组细胞的凋亡率,采用RT-PCR检测Caspase-3、Caspase-9、JNK、BAX、Bcl-2的mRNA的表达,使用Western blot检测Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9、JNK、p-JNK、BAX、Bcl-2蛋白的表达.结果 与对照组相比,随着氯化锂浓度和处理时间增加,氯化锂对HEI-OC1毛细胞样细胞的抑制率逐渐增高(P<0.01),拟合出氯化锂在24小时的IC50值为69.53 mM,故实验组氯化锂处理浓度取70 mM.TUNEL法显示实验组凋亡率(36.00％ ±2.65％)较对照组(2.33％ ±0.58％)明显提高(t=21.53,P<0.01);流式细胞术检测结果显示,与对照组(0.42％ ±0.02％)相比,实验组凋亡率(42.40％ ±0.82％)明显上升(t=88.33,P<0.01).RT-PCR实验结果表明,与对照组相比,实验组Caspase-3、Caspase-9、JNK、BAX mRNA表达增加,Bcl-2 mRNA表达减少(均为P<0.01).Western blot实验结果表明,与对照组相比,实验组Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9、p-JNK、BAX蛋白表达增加,Bcl-2、Bcl-2/BAX蛋白表达减少(均为P<0.01);与实验组相比,JNK抑制组Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9、p-JNK、BAX蛋白表达减少,Bcl-2、Bcl-2/BAX蛋白表达增加(均为P<0.01).结论 氯化锂通过JNK信号通路诱导HEI-OC1毛细胞样细胞的凋亡.