人雌激素相关受体α配体结合域的原核表达载体构建·表达及鉴定

摘要

[目的]构建含人雌激素相关受体α配体结合域区段的原核表达载体,并在大肠杆菌表达系统中表达.[方法]用Trizol试剂提取入肺腺癌A549细胞总RNA,逆转录为cDNA;应用PCR扩增入EERα-LBD基因片段,插入表达栽体pET-30a-c(+)中;转化大肠杆菌BL21(DE3)PLysS,经IPTG诱导后表达并鉴定.[结果]应用PCR方法扩增出约687 bp的基因片段,酶切、纯化、连接至载体后,经测序与GenBank中的一致,表达蛋白相对分子质量约32 kD,纯化后用生物大分子相互作用系统鉴定为目的蛋白.[结论]已成功获得人EERα-LBD融合蛋白,为进一步的研究和应用奠定了基础.