肉鸡IFN-alpha基因的克隆、序列分析以及在大肠杆菌中的表达

摘要

干扰素(IFN)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤以及免疫调节等活性的细胞因子.本研究通过PCR从AA肉鸡基因组DNA中克隆了IFN- (ChIFN- )基因,测序分析,并将该基因与表达载体pQE30相连,构建重组表达质粒pQE30/ChIFN- ,以IPTG诱导在M15中进行表达.测序结果表明ChIFN- 的开放阅读框(ORF)是由486个核苷酸编码的,成熟蛋白为162个氨基酸,有4个糖基化位点,推测分子量为19 kD.与DDBJ/Genbank 中鸡IFN- 基因序列一致.表达产物经SDS-PAGE 分析、1D-MULTI分析及Western Blot分析表明,表达出19 kD左右的融合蛋白,表达的蛋白量占总菌体蛋白的6.5 %,包涵体占沉淀蛋白的30 %.本研究为重组干扰素用作新型广谱抗病毒生物制剂和免疫增强剂的开发奠定了基础.