核酸探针检测人工感染猪及死胎的猪繁殖与呼吸综合症病毒

摘要

利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)美洲株ATCC VR-2332 ORF6及部分ORF7 586 bp的cDNA.将PCR产物连接进线状克隆载体 pGEM-T easy vector后获阳性重组质粒.用EcoRI及SmaI双酶切阳性重组质粒DNA,回收463 bp的小片段并以此制备出地高辛标记的核酸探针.应用该探针对4头鼻内人工感染ATCC VR-2332的45日龄SPF猪感染后不同时间体内的PRRSV分布进行了研究.结果显示,在感染后30 h,即可在扁桃体、肺脏、脾脏、肝脏、肾脏、胸腺、心脏、脑、淋巴结、鼻粘膜、胰腺、睾丸、附睾等组织中检出病毒,且一直持续至实验结束(人工感染后28 d).应用探针对人工感染PRRSV北京分离株BJ-4的4头SPF猪及4例死胎的组织进行了检测,均可在肺门淋巴结、胸腺、脑、扁桃体等组织中发现阳性杂交信号.这些结果表明,制备的核酸探针可用于猪繁殖与呼吸综合症的临床诊断.