大丽轮枝菌RAPD反应组分的优化与应用

摘要

根据正交实验理论,设计一种优化RAPD各个反应组分以获得理想图谱的最佳反应浓度方法,能够显著减少反应组分优化次数.大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)RAPD扩增最优反应组分浓度为:MgCl2 3.5 mmol/L,dNTP 0.25 mmol/L,引物15 pmol/L,Taq酶1.5U,DNA 5ng.实验表明,MgCl2与dNTP浓度之比是影响RAPD扩增效果的最主要因素.根据优化的反应组分,用9个随机引物对来自江苏南通、射阳、泗阳、盐都4个群体53个大丽轮枝菌菌株进行RAPD扩增,对各个群体的遗传结构分析表明,各地群体遗传相似性较高.