无花果曲酶植酸酶基因phyA的克隆、序列分析及表达

摘要

用RT-PCR方法从无花果曲酶(Aspcrgillus ficuum 3.4322)中扩增出1条约1.4kb的特异性条带,并将其克隆到pMD18-T载体中.DNA序列测定表明,目的片段为不含信号肽的植酸酶编码序列,全长1 347bp,编码448个氨基酸.该基因序列已在GenBank注册(注册号为:AF537344).将该基因克隆到酵母表达载体pYES2中,构建成不带信号肽phyA基因的重组表达载体pYPA2.用醋酸锂法将pYPA2转进Ura缺陷型的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiaeINVScl),筛选获得含植酸酶基因的酵母转化子.经半乳糖诱导表达后,用磷钼蓝显色(AMES)法对酵母菌体进行酶活性测定,测出了明显的植酸酶活性,pYPA2胞内植酸酶活性约11.55U/L,表明无花果曲酶phyA基因能在酿酒酵母中表达.