豇豆胰蛋白酶抑制剂和硫氧还蛋白的融合表达和活性测定

摘要

采用融合蛋白表达技术,通过1个人工设计合成的柔性接头,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(cowpeatrypsininhibitor,CpTl)基因与表达载体上的硫氧还蛋白(thioredoxin)基因连接,构建了融合表达载体.将表达载体转入大肠杆菌(Escherichia coli)GI724,通过色氨酸诱导获得高效表达,产物以可溶状态存在.活性测定显示,融合蛋白具有抑制胰蛋白酶的生物学活性.以大豆胰蛋白酶抑制剂为参照,将融合蛋白热处理后进行活性测定,发现它具有较好的热稳定性.将肠激酶(enterokinase)与融合蛋白在37℃作用16 h,可获得切掉thioredoxin的CpTI蛋白.活性测定显示,切除thioredoxin后CpTI的胰蛋白酶抑制活性比同样处理条件下的thioredoxin-CpTI明显下降,比活力仅为原来的80%,说明融合蛋白具有更高的稳定性.研究结果为thioredoxin-CpTI作为一种生物农药的应用奠定了基础.