鸡胚原始生殖细胞的分离、培养及鉴定

摘要

采用Ficoll密度梯度离心法分离第19期(孵化68～72 h)艾维茵鸡(Gallus domesticus)生殖嵴原始生殖细胞(PGC),通过体细胞-PGC共培养进行了原代和传代培养,对PGC进行了碱性磷酸酶(AKP)和过碘酸雪夫氏反应(PAS)鉴定,并用细胞增殖核抗原(PCNA)免疫细胞化学检测了传代于鸡胚饲养层上PGC的增殖活性.培养的PGC经AKP和PAS鉴定均为阳性,AKP阳性为红棕色,PAS阳性为深红色,PCNA染色显示PGC集落为红棕色,表明PGC处于增殖状态.同时比较了不同体外培养条件(5%～20%胎牛血清(FCS),ITS培养液(M199+10μg/mL胰岛素+5μg/mL转铁蛋白+3×10-8 mol/L亚硒酸钠),条件培养液,15%FCS+ITS,15%FCS+40%条件培养液)下PGC增殖情况.发现未经密度梯度离心的PGC生长较离心的PGC好,且5%FCS在原代培养中起较好的促增殖作用;而传代培养时在不同培养条件下,5%FCS组或ITS组形成的PGC集落的直径较大,而仅用单纯的条件培养液效果并不明显.结果表明除鸡胚饲养层可作为PGC增殖的支持体系外,在体细胞-PGC共培养方式下5%FCS或单独的ITS也可作为PGC体外增殖的一种培养体系.