睾丸酮丛毛单胞菌teiR基因载体构建及在大肠杆菌中的表达

摘要

提取睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)基因组DNA,利用PCR扩增teiR基因,将扩增产物克隆到pKtac2(含强启动子tac)和pK18中,构建重组质粒pKtac2-teiR和pKteiR100.将重组质粒分别转化大肠杆菌(Escherichia coli)HB101,提取细菌总蛋白,ELISA测定细菌总蛋白中TeiR蛋白的表达量,结果表明:含如tac强启动子的pKtac2-teiR转化大肠杆菌后,TeiR蛋白的表达量可以达到6.65 μg/mg,比pKteiR100的表达量高出0.72μg/mg.将p6(含3a-HSD/CR基因)分别和重组质粒(pKtac2-teiR和pKteiR100)共转化大肠杆菌HB101,测定细菌总蛋白中3a-HSD/CR和TeiR的表达量,结果表明:在大肠杆菌中teiR基因可以明显促进3a-HSD/CR基因的表达,pKtac2-teiR与p6共转化大肠杆菌后teiR基因的表达量比pKteiR100与p6共转化后teiR基因的表达量高,其TeiR蛋白表达量分别为5.94和5.33 μg/mg;添加终浓度1 mmol/L,的IPTG诱导,其TeiR蛋白的表达量分别为6.81和6.10 μg/mg.但是pKtac2-teiR与p6共转化后的3a-HSD/CR的表达量低于pKteiR100与p6共转化后的3a-HSD/CR的表达量,未添加IPTG诱导,3a-HSD/CR的蛋白表达量依次为1.20和1.71 μg/mg;添加终浓度为1mmol/L IPTG诱导,其3a-HSD/CR的蛋白表达量依次为1.42和1.80 μg/mg.