农杆菌浸种法介导中华结缕草遗传转化体系的建立

摘要

以中华结缕草(Zoysia sinica Hance)萌动种子为转化受体,利用新霉素磷酸转移酶基因(neomycin phosphotransferaseⅡ,nptⅡ)作为筛选基因,对影响根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的遗传转化外部因素进行了实验,通过优化转化条件,建立了农杆菌浸种途径介导的中华结缕草遗传转化体系.结果表明,利用催芽6～7 d的种子,加入OD600为0.9的农杆菌浸染菌液(在浸染菌液中添加100μmol/L乙酰丁香酮),附加5 min抽真空并在迅速恢复常压后再抽真空30 s的处理,振荡浸染48 h,共培养3 d后用75 mg/L卡那霉素筛选能够获得较好的转化效果.通过对卡那霉素抗性苗进行PCR检测和GUS组织化学染色.初步验证nptⅡ和β-葡萄糖苷酶基因(β-glueuronidase,gus)已经整合进植物基因组,阳性转化率为55.21%.