热硫化氢高温厌氧杆菌的Ttx31基因克隆、表达与功能分析

摘要

生物信息学分析发现,热硫化氢高温厌氧杆菌(Thermowmerobacter thermohydrosulfuricus)的α-淀粉酶/普鲁兰糖酶(α-amylase/pullulanase)基因中的一段未知功能序列Ttx31可能编码碳水化合物结合结构域(carbohydrate binding module,CBM),但其结合特性未知.本实验以T. thermohydrosulfuricus为材料,通过菌落PCR扩增其Tts31序列,将获得的Ttx31克隆到表达载体pET22b(+)中得到重组质粒pEX31,序列分析表明,所得重组表达载体pEX31中的Ttx31序列正确.将重组载体pEX31转入大肠杆菌宿主表达菌Tuner中,IPTG诱导表达后纯化,采用SDS-PAGE电泳和非变性亲和凝胶电泳法,研究重组表达的目的蛋白TtX31与糖的相互作用.结果发现,TtX31能结合糊精,但不能结合可溶性淀粉、普鲁兰糖、支链淀粉等.实验结果可以认为TtX31是一种功能性的新碳水化合物结合结构域,可以结合糊精.