嗜热厌氧乙醇杆菌——大肠杆菌穿梭载体的构建

摘要

嗜热菌是指一类能够在 55 ℃以上温度下正常生长和繁殖的细菌群体。本研究以嗜热厌氧乙醇杆菌 Thermoanaerobacter ethanolicus JW 200 为研究对象，构建嗜热厌氧乙醇杆菌-大肠杆菌穿梭载体。
　　 嗜热厌氧乙醇菌是一种专性厌氧、嗜高温的革兰氏阳性菌，能广泛地以廉价的淀粉、木聚糖等已糖和戊糖为底物进行发酵，产生以乙醇为主的代谢产物。由于它具有工业生产乙醇的潜力，国际上对嗜热厌氧乙醇菌菌株JW200与39E均有深人研究。但是该菌遗传转化系统的缺少，制约了对该菌应用领域和理论基础的进一步研究。
　　 本文先对已经构建好的穿梭质粒 pTE16 进行改造，通过替换筛选标记上原有的启动子以期在嗜热菌中能稳定存在。再通过引入大肠杆菌的组成型启动子使该筛选标记在大肠杆菌中发挥作用。在大肠杆菌中，对重组质粒进行氯霉素抗性实验，结果仅能在氯霉素浓度为 10μg/ml的培养基中生长。同时，对 pHsh 进行改造，将其上的σ 70 专门识别的标准启动子突变为大肠杆菌和嗜热厌氧乙醇菌中均能被识别的启动子，再通过把革兰氏阳性细菌Clostridium perfringens的复制子克隆进突变后的pHsh 构建新型的嗜热厌氧乙醇杆菌-大肠杆菌穿梭载体。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 综述

第二章 材料与方法

第三章 结果

第四章 讨论

主要结论

参考文献

致 谢