猪血清白蛋白基因(alb)启动子克隆及活性分析

摘要

血清白蛋白(albumin,alb)是血清中重要的运输蛋白,主要由肝脏合成.本研究旨在确定猪血清alb启动子活性区域及其主要调控元件,探索alb基因的表达调控机制.首先通过qRT-PCR方法检测猪(Sus scorfa)不同组织及肝脏细胞系(hepal-6)、和胎儿成纤维细胞系(PEF)中内源性alb基因表达情况；采用基因克隆,DNA测序等技术手段,构建含有5个不同长度猪alb基因启动子区域的双荧光素酶报告基因载体,分别转染hepal-6以及PEF,检测不同长度启动子活性.结果表明,猪alb基因为肝脏特异性表达基因；其启动子能启动体外荧光素酶报告基因表达；其核心启动子区域位于-184～-31 bp,该段序列的缺失造成启动子启动活性丧失；-184～-2 034bp间存在参与猪alb基因表达调控的潜在正负调控元件.本研究构建了含有5个五指山猪alb基因启动子片段的双荧光素酶报告载体,确定了该基因的启动子核心区域,预测了alb基因起始密码子上游约2kb内主要调控元件,有助于进一步研究该基因表达调控分子机制以及构建外源基因组织特异性表达载体.